Parimet dhe metodat e analizës sasiore me kromatografi të lëngët

Mekanizmi i ndarjes së kromatografisë së lëngshme bazohet në ndryshimin në afinitetin e përbërësve në përzierje për të dy fazat.

Sipas fazave të ndryshme stacionare, kromatografia e lëngët ndahet në kromatografi të lëngët-ngurtë, në kromatografi të lëngët-lëngtë dhe në kromatografi të fazës së lidhur.Më të përdorurat janë kromatografia e lëngët-ngurtë me xhel silicë si mbushës dhe kromatografia e fazës së lidhur me mikrosilicë si matricë.

Sipas formës së fazës stacionare, kromatografia e lëngët mund të ndahet në kromatografi kolone, kromatografi letre dhe kromatografi me shtresë të hollë.Sipas kapacitetit adsorbues, mund të ndahet në kromatografi adsorbuese, kromatografi ndarëse, kromatografi të shkëmbimit të joneve dhe kromatografi me depërtim xhel.

Vitet e fundit, sistemit të kromatografisë së kolonës së lëngshme i është shtuar një sistem i rrjedhës së lëngut me presion të lartë për të bërë që faza e lëvizshme të rrjedhë me shpejtësi nën presion të lartë për të përmirësuar efektin e ndarjes, kështu që kromatografia e lëngshme me efikasitet të lartë (e njohur edhe si me presion të lartë) është shfaqur.

PJESA
01 Parimi i analizës sasiore të kromatografisë së lëngët

Për të vlerësuar në bazë cilësore, substancat e pastra kërkohen si standarde;

Kuantifikimi i kromatografisë së lëngshme është një metodë relativisht sasiore: domethënë, sasia e analitit në përzierje vlerësohet nga një sasi e njohur e kampionit të pastër standard.

PJESA
02 Baza për kuantifikimin me kromatografi të lëngët

Sasia e komponentit të matur (W) është proporcionale me vlerën e përgjigjes (A) (lartësia e pikut ose sipërfaqja e pikut), W=f×A.

Faktori i korrigjimit sasior (f): Është konstanta e proporcionalitetit të formulës së llogaritjes sasiore dhe kuptimi fizik i saj është sasia e komponentit të matur e përfaqësuar nga vlera e përgjigjes njësi (zona e pikut).

Faktori i korrigjimit sasior mund të merret nga sasia e njohur e mostrës standarde dhe vlera e përgjigjes së saj.

Matni vlerën e përgjigjes së komponentit të panjohur dhe sasia e komponentit mund të merret nga faktori i korrigjimit sasior.

PJESA
03 Terma të zakonshëm në analizën sasiore

Mostra (kampioni): një tretësirë ​​që përmban një analit për analizë kromatografike.Ndarë në mostra standarde dhe të panjohura.

Standard: Një produkt i pastër me një përqendrim të njohur.Mostra e panjohur (e panjohur): Përzierja përqendrimi i së cilës do të testohet.

Pesha e kampionit: Pesha origjinale e kampionit që do të testohet.

Hollimi: Faktori i hollimit të kampionit të panjohur.

Komponenti: kulmi kromatografik që do të analizohet në mënyrë sasiore, domethënë, analit përmbajtja e të cilit nuk dihet.

Sasia e komponentit (sasia): përmbajtja (ose përqendrimi) i substancës që do të testohet.

Integeriteti: Procesi llogaritës i matjes së sipërfaqes së pikut të një piku kromatografik nga një kompjuter.

Kurba e kalibrimit: Një kurbë lineare e përmbajtjes së komponentit kundrejt vlerës së përgjigjes, e krijuar nga një sasi e njohur e substancës standarde, e përdorur për të përcaktuar përmbajtjen e panjohur të analitit.

PJESA
04 Analiza sasiore e kromatografisë së lëngët

1. Zgjidhni një metodë kromatografike të përshtatshme për analizë sasiore:

l Konfirmoni kulmin e komponentit të zbuluar dhe arrini një rezolucion (R) më të madh se 1,5

l Përcaktoni konsistencën (pastërtinë) e majave kromatografike të përbërësve të testuar

l Përcaktoni kufirin e zbulimit dhe kufirin sasior të metodës;ndjeshmëria dhe diapazoni linear

2. Krijoni një kurbë kalibrimi me mostra standarde të përqendrimeve të ndryshme

3. Kontrolloni saktësinë dhe saktësinë e metodave sasiore

4. Përdorni softuerin përkatës të menaxhimit të kromatografisë për të zbatuar mbledhjen e mostrave, përpunimin e të dhënave dhe raportimin e rezultateve

PJESA
05 Identifikimi i majave sasiore (cilësore)

Identifikoni në mënyrë cilësore çdo kulm kromatografik që do të përcaktohet

Së pari, përdorni mostrën standarde për të përcaktuar kohën e mbajtjes (Rt) të pikut kromatografik që do të përcaktohet.Duke krahasuar kohën e mbajtjes, gjeni përbërësin që korrespondon me çdo kulm kromatografik në kampionin e panjohur.Metoda cilësore kromatografike është krahasimi i kohës së mbajtjes me kampionin standard.Kriteri I pamjaftueshëmkonfirmim i mëtejshëm (cilësor)

1. Metoda standarde e shtimit

2. Përdorni metoda të tjera në të njëjtën kohë: metoda të tjera kromatografike (ndryshoni mekanizmin, si: përdorimi i kolonave të ndryshme kromatografike), detektorë të tjerë (PDA: krahasimi i spektrit, kërkimi i bibliotekës së spektrit; MS: analiza e spektrit masiv, kërkimi i bibliotekës së spektrit)

3. Instrumente dhe metoda të tjera

PJESA
06 Konfirmimi i konsistencës sasiore të pikut

Konfirmo konsistencën e pikut kromatografik (pastërtinë)

Sigurohuni që të ketë vetëm një komponent të matur nën çdo kulm kromatografik

Kontrolloni për ndërhyrje nga substancat bashkë-elutore (papastërtitë)

Metodat për konfirmimin e konsistencës së pikut kromatografik (pastërtia)

Krahasimi i spektrogrameve me detektorët e matricës së fotodiodës (PDA).

Identifikimi i pastërtisë së pikut

2996 Teoria e këndit të pastërtisë

Metodat sasiore që përdoren zakonisht në PJESA 07

Metoda standarde e kurbës, e ndarë në metodën standarde të jashtme dhe metodën standarde të brendshme:

1. Metoda standarde e jashtme: më i përdorur në kromatografinë e lëngët

Një seri mostrash standarde të përqendrimeve të njohura u përgatitën duke përdorur mostra të pastra të përbërjeve që do të testoheshin si mostra standarde.injektuar në kolonë deri në vlerën e përgjigjes së saj (zona e pikut).
Brenda një intervali të caktuar, ekziston një marrëdhënie e mirë lineare midis përqendrimit të kampionit standard dhe vlerës së përgjigjes, përkatësisht W= f×A, dhe bëhet një kurbë standarde.

Nën të njëjtat kushte eksperimentale, injektoni mostrën e panjohur për të marrë vlerën e përgjigjes së komponentit që do të matet.Sipas koeficientit të njohur f, mund të merret përqendrimi i komponentit që do të matet.

Përparësitë e metodës standarde të jashtme:operacion dhe llogaritje e thjeshtë, është një metodë sasiore e përdorur zakonisht;nuk ka nevojë që secili komponent të zbulohet dhe elurohet;kërkohet mostra standarde;kushtet e matjes së kampionit standard dhe kampionit të panjohur duhet të jenë konsistente;vëllimi i injektimit duhet të jetë i saktë.

Disavantazhet e metodës standarde të jashtme:Kushtet eksperimentale kërkohet të jenë të larta, të tilla si ndjeshmëria e detektorit, shpejtësia e rrjedhës dhe përbërja e fazës së lëvizshme nuk mund të ndryshohet;vëllimi i çdo injeksioni duhet të ketë përsëritshmëri të mirë.

2. Metoda standarde e brendshme: i saktë, por i mundimshëm, më i përdorur në metodat standarde

Një sasi e njohur e standardit të brendshëm i shtohet standardit për të bërë një standard të përzier dhe përgatiten një sërë standardesh pune me përqendrim të njohur.Raporti molar i standardit ndaj standardit të brendshëm në standardin e përzier mbetet i pandryshuar.Injektoni në kolonën kromatografike dhe merrni (zonën standarde të pikut të mostrës/zonën standarde të brendshme të pikut të mostrës) si vlerë të përgjigjes.Sipas marrëdhënies lineare ndërmjet vlerës së përgjigjes dhe përqendrimit të standardit të punës, përkatësisht W= f×A , bëhet një kurbë standarde.

Një sasi e njohur e standardit të brendshëm i shtohet kampionit të panjohur dhe injektohet në kolonë për të marrë vlerën e përgjigjes së komponentit që do të matet.Sipas koeficientit të njohur f, mund të merret përqendrimi i komponentit që do të matet.

Karakteristikat e metodës së standardit të brendshëm:Gjatë operimit, kampioni dhe standardi i brendshëm përzihen së bashku dhe injektohen në kolonën kromatografike, kështu që për sa kohë që raporti i sasisë së përbërësit të matur me standardin e brendshëm në tretësirën e përzier është konstant, ndryshimi i vëllimit të kampionit. nuk do të ndikojë në rezultatet sasiore..Metoda e standardit të brendshëm kompenson ndikimin e vëllimit të mostrës, madje edhe fazën e lëvizshme dhe detektorin, kështu që është më e saktë se metoda standarde e jashtme.

PJESA
08 Faktorët që ndikojnë në rezultatet e analizës sasiore

Saktësia e dobët mund të shkaktohet nga:

Integrimi i gabuar i zonës së pikut, dekompozimi i kampionit ose papastërtitë e futura gjatë përgatitjes së kampionit, shishja e mostrës jo e mbyllur, avullimi i mostrës ose tretësi, përgatitja e gabuar e mostrës, problemet e injektimit të mostrës, përgatitja e gabuar e standardit të brendshëm

Arsyet e mundshme për saktësi të dobët:

Integrim i gabuar i pikut, probleme me injektimin ose injektorin, dekompozimi i mostrës ose papastërtitë e futura gjatë përgatitjes së kampionit, probleme kromatografike, reagimi i degraduar i detektorit